非洲豬瘟的準(zhǔn)確、快速診斷對(duì)于防止 ASF 蔓延、快速撲滅和根除尤其重要。ASFV 自然感染的潛伏期大約為 4—19天 (Wardley et al., 1983)，感染后 7-10 天血液中可檢測(cè)到抗體。一個(gè)地區(qū)或豬場(chǎng)首次暴發(fā) ASF 時(shí)呈最急性、急性感染臨床癥狀，感染豬只表現(xiàn)為急性出血、死亡，由于首次暴發(fā)時(shí)發(fā)病豬只在抗體出現(xiàn)前就已經(jīng)死亡，此時(shí)首選抗原檢測(cè)方法。隨著病毒循環(huán)和擴(kuò)散，其毒力會(huì)下降，感染豬只表現(xiàn)為亞急性和慢性感染臨床癥狀 ，此時(shí)抗體檢測(cè)更適用于疫情的監(jiān)測(cè)和 ASF 根除計(jì)劃。

當(dāng)前想復(fù)養(yǎng)的豬場(chǎng)比比皆是，但對(duì)于如何才能確保復(fù)養(yǎng)的高成功率，心里面可能都沒有底，加上耳聞目睹的案例是成功的少失敗的多，更讓一些豬場(chǎng)不知所措。其實(shí)，發(fā)生了非瘟的豬場(chǎng)復(fù)養(yǎng)真的那么難嗎？這其中又是哪些環(huán)節(jié)是真正制約我們的因素？總結(jié)國(guó)內(nèi)成功復(fù)養(yǎng)場(chǎng)的經(jīng)驗(yàn)，我認(rèn)為在復(fù)養(yǎng)洗消過(guò)程中科學(xué)而經(jīng)濟(jì)的檢測(cè)手段必不可少。

一、非瘟病毒在各種環(huán)境下的適應(yīng)力與豬場(chǎng)改造方案緊密關(guān)聯(lián)

表1：《非洲豬瘟的科學(xué)觀點(diǎn)》

表2：不同環(huán)境中的存活能力

表3：非瘟病毒的熱耐受能力（多方數(shù)據(jù)來(lái)源）

由表1可以知道以下幾個(gè)重要參數(shù)，非瘟病毒在豬場(chǎng)糞便中僅能存活11天，在被污染的豬圈中至多能存活一個(gè)月，但在腐爛的血液中可以存活15周左右的時(shí)間，因此在整個(gè)洗消過(guò)程中清除血跡十分重要，地板縫隙、金屬欄桿、墻面、飼槽要做到先浸泡再打上泡沫發(fā)泡劑，然后使用高壓熱水（45度左右）強(qiáng)力沖洗，去除環(huán)境中的血跡應(yīng)該不在話下，之后再以2~3%的火堿噴灑殺滅非瘟病毒；豬場(chǎng)金屬欄桿上如果污垢較多，可以用鋼絲刷進(jìn)行強(qiáng)力清洗或者重新上油漆。

復(fù)產(chǎn)清掃過(guò)程中工程量大的其實(shí)是豬舍周邊被污染的土壤、木質(zhì)墊板上的血跡，筆者建議發(fā)過(guò)非瘟的豬場(chǎng)豬舍之間的道路最好使用C30混凝土進(jìn)行硬化，豬舍與豬舍間的空地先鏟去表層3cm土壤，然后覆蓋上生石灰（晴天注意適當(dāng)澆水），包括死豬深埋處及氧化塘周邊也要清除表層部分土壤，再覆蓋上生石灰，確保安全。這些鏟走的土壤必須混合上生石灰找地方挖坑深埋處理。

而對(duì)于那些可能被污染的木質(zhì)材料、飼料袋、外包裝盒等，能焚燒的則全部焚燒，豬舍今后內(nèi)部不使用木質(zhì)材料，全部換上鋼絲繩綁定電器開關(guān)、插座。妊娠限位欄如果是通貫飼槽，建議敲碎重新做成瓷磚通貫水槽或干脆換上單個(gè)不銹鋼飼槽。

復(fù)養(yǎng)是一個(gè)系統(tǒng)工程，豬場(chǎng)應(yīng)該抓住全面清群之后5-8個(gè)月時(shí)間作適當(dāng)?shù)母脑?，新建種豬隔離舍、過(guò)渡生活區(qū)（人員至少能在其中生活兩天），重新規(guī)劃全場(chǎng)人員行走路線，嚴(yán)格做到凈道、污道分開、如上圖所示，場(chǎng)內(nèi)設(shè)有專門的進(jìn)豬通道、專門的出豬通道、專門的死豬處理通道，并在全場(chǎng)地圖上標(biāo)示出來(lái)，不能凈道、污道混合共用一條道路，那樣可能形成交叉感染。每個(gè)崗位、每個(gè)人的行走路線都要事先規(guī)劃，嚴(yán)格遵循由凈區(qū)向污區(qū)單向流動(dòng)原則，人員之間盡量避免交叉污染的可能。新增一些必要的設(shè)施和設(shè)備，如中轉(zhuǎn)料塔、中轉(zhuǎn)對(duì)接平臺(tái)、中央高壓清洗系統(tǒng)（含熱水）、PCR檢測(cè)設(shè)備及試劑、員工衣柜、鞋柜、洗手池、洗澡間等，要讓員工感覺場(chǎng)內(nèi)洗澡就象是在外面洗浴中心淋浴一樣舒心，購(gòu)買“飄柔”等名牌洗頭膏，使用專門的沐浴露，同時(shí)注意浴室防滑設(shè)計(jì)，甚至可以增加桑拿間，這樣員工就不會(huì)逃避沐浴，沐浴時(shí)間遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)十分鐘，有條件的豬場(chǎng)在淋浴處還配備專門的衛(wèi)生間，員工換洗下來(lái)的衣服馬上就可以放進(jìn)洗衣機(jī)（帶烘干功能更好）浸泡洗干凈，每位員工擦干身體有專門的大浴巾。一個(gè)豬場(chǎng)的生物安全水平高低，通過(guò)他的洗澡間設(shè)施及員工滿意度調(diào)查基本可知。

二、洗消過(guò)程中如何靈活應(yīng)用各種檢測(cè)手段？

目前非瘟檢測(cè)常用的是qPCR方法，qPCR檢測(cè)最大的缺陷就是檢測(cè)樣本量大時(shí)容易造成實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的污染，且采樣后要送相關(guān)實(shí)驗(yàn)室等待結(jié)果，因此一個(gè)實(shí)驗(yàn)室每天的檢測(cè)樣數(shù)量有著嚴(yán)格的規(guī)定，且qPCR檢測(cè)一個(gè)樣品的成本基本在20元以上，1000個(gè)樣那就是20000元，某種程度上成本還是較高的?，F(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)究竟有沒有更為經(jīng)濟(jì)有效的方法呢？

其實(shí)是有的。發(fā)生非瘟復(fù)養(yǎng)場(chǎng)可以在第一遍粗洗、第二遍細(xì)洗中科學(xué)運(yùn)用手持ATP檢測(cè)儀進(jìn)行檢測(cè)，因?yàn)槭鞘殖謾z測(cè)儀器在現(xiàn)場(chǎng)操作更加方便，十幾秒鐘即能知道哪里洗消存在著死角，從邏輯上講，如果豬場(chǎng)洗消后設(shè)施上還有蛋白和細(xì)菌存在，就不要談ASF病毒能否清除干凈；只有在第三遍精洗及消毒后隔半個(gè)小時(shí)以上才使用qPCR全面檢測(cè)，這樣能有效的節(jié)省檢測(cè)費(fèi)用，同時(shí)也達(dá)到洗消檢測(cè)的目的。下面重點(diǎn)介紹一下ATP熒光檢測(cè)。

ATP(Adenosine Triphosphate)，中文名為腺嘌呤核苷三磷酸，又叫三磷酸腺苷。它普遍存在于細(xì)菌等微生物細(xì)胞內(nèi)，ATP是微生物新陳代謝的能量物質(zhì)。ATP生物發(fā)光法是利用ATP試劑中若干組分如熒光素‐熒光素酶等與被測(cè)樣本反應(yīng)產(chǎn)生光子，再利用專門研制的熒光檢測(cè)儀來(lái)捕捉和檢測(cè)發(fā)光值，由于被測(cè)樣本所含細(xì)菌等微生物的數(shù)量與所含的ATP值、以及ATP值與發(fā)光值之間存在一定的函數(shù)關(guān)系，因此通過(guò)檢測(cè)發(fā)光值即能得到被測(cè)標(biāo)本所含細(xì)菌等微生物含量。

ATP檢測(cè)技術(shù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確可靠，值得信賴。美國(guó)多個(gè)專業(yè)權(quán)威機(jī)構(gòu)研究了1000個(gè)以上的樣品，這種只需十幾秒就能完成檢測(cè)的快速檢測(cè)法所得到的實(shí)驗(yàn)結(jié)果90%以上與24‐48小時(shí)標(biāo)準(zhǔn)細(xì)菌培養(yǎng)法/平皿法所得結(jié)果一致。測(cè)試飲用水時(shí)，比標(biāo)準(zhǔn)法靈敏度大100倍以上，而樣品量只要傳統(tǒng)方法的1/100。測(cè)定結(jié)果與傳統(tǒng)細(xì)菌培養(yǎng)法所得結(jié)果相比，相關(guān)性高達(dá)92‐98%。加拿大食品監(jiān)查協(xié)會(huì)經(jīng)過(guò)比對(duì)實(shí)驗(yàn)后發(fā)現(xiàn)，本產(chǎn)品測(cè)定結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)法的相關(guān)性是98%。美國(guó)FDA推薦使用ATP檢測(cè)系統(tǒng)和試劑盒用于牛奶細(xì)菌數(shù)的快速檢測(cè)。

2010年，國(guó)內(nèi)手持式ATP熒光檢測(cè)儀和現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)ATP試劑一體化拭子進(jìn)入批量生產(chǎn)，性能完全能滿足食品藥品監(jiān)督部門、衛(wèi)生監(jiān)督部門、食品加工行業(yè)、餐飲服務(wù)行業(yè)、航空配餐、大型企業(yè)食堂、學(xué)校食堂、大型活動(dòng)保障部門等食品安全涉及環(huán)境物體表面檢測(cè)、手衛(wèi)生檢測(cè)、餐飲具表面潔凈度檢測(cè)；化妝品制造業(yè)污染控制、醫(yī)院感染控制、空氣細(xì)菌污染檢測(cè)、環(huán)境監(jiān)管部門等污染監(jiān)管領(lǐng)域細(xì)菌檢測(cè)和表面潔凈度檢測(cè)。我想檢測(cè)豬場(chǎng)衛(wèi)生應(yīng)該更不在話下。

ATP熒光檢測(cè)法能在十幾秒內(nèi)實(shí)現(xiàn)檢測(cè)，大大提升了傳統(tǒng)細(xì)菌培養(yǎng)法24‐48小時(shí)的工作效率，ATP方法的實(shí)現(xiàn)包括儀器、試劑和如何使用三大要素。

儀器為了滿足現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)的需求，ATP熒光檢測(cè)儀宜選擇手持式從而實(shí)現(xiàn)流動(dòng)狀態(tài)即時(shí)檢測(cè)，當(dāng)儀器和試劑配合使用，整體靈敏度達(dá)到10-15～10-18mol/L范圍時(shí)，可以用于食品表明微生物檢測(cè)、手衛(wèi)生檢測(cè)、餐飲器具潔凈度檢測(cè)。

試劑專用的ATP試劑盒，必須是可去除游離ATP和體細(xì)胞ATP，只針對(duì)細(xì)菌細(xì)胞ATP檢測(cè)，所謂去除干擾物，這是基本要求。其次熒光素酶、蟲螢光素、裂解液、取樣拭子等組分最好設(shè)計(jì)成一體化，整體便于現(xiàn)場(chǎng)攜帶方便檢測(cè)使用。

如何使用 取樣是影響準(zhǔn)確性和一致性的關(guān)鍵之一，可按照醫(yī)院消毒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)等規(guī)范要求，參照手持式ATP儀說(shuō)明書采樣、檢測(cè)、計(jì)算得出結(jié)果并記錄報(bào)告。運(yùn)輸車輛及環(huán)境清洗參考值設(shè)定為80RUL。下面介紹一下ATP熒光儀使用方法。

手持式ATP檢測(cè)儀，操作十分方便

ATP熒光檢測(cè) 的優(yōu)勢(shì)所在

l靈敏度高—— 10-15～10-18mol/L；

l速度快——常規(guī)培養(yǎng)法至少18-24h以上，而ATP只需要幾分鐘；

l可行性——微生物數(shù)量與微生物體內(nèi)所含ATP有著明確的相關(guān)性。通過(guò)檢測(cè)ATP含量，可間接得出反應(yīng)中微生物數(shù)量；

l可操作性——傳統(tǒng)細(xì)菌培養(yǎng)方法需在實(shí)驗(yàn)室由經(jīng)過(guò)培訓(xùn)的技術(shù)人員進(jìn)行操作；而ATP快速潔凈度檢測(cè)操作非常簡(jiǎn)便，只需簡(jiǎn)單的培訓(xùn)即可由一般工作人員進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)操作；

l性價(jià)比更高—— ATP生物熒光檢測(cè)與實(shí)驗(yàn)室熒光PCR比，費(fèi)用大大降低。

總之，科學(xué)而實(shí)用的ATP熒光檢測(cè)能節(jié)省時(shí)間和檢測(cè)的工作量，同時(shí)也能節(jié)省檢測(cè)費(fèi)用，希望想復(fù)養(yǎng)的豬場(chǎng)能把這個(gè)檢測(cè)方法能靈活應(yīng)用于豬場(chǎng)復(fù)養(yǎng)洗消過(guò)程中，從而減少qPCR的采樣數(shù)，減輕實(shí)驗(yàn)室的工作量，減少實(shí)驗(yàn)誤操作的可能性。