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一、藥敏試驗操作步驟
1制作待檢菌液
在超凈工作臺內挑取培養(yǎng)18-24h普通營養(yǎng)瓊脂平板上的菌落，懸于含3ml無菌生理鹽水的試管中。混勻后與比濁管比濁，調整濁度至0.5麥氏標準（相當于1-2*10 cfu/ml）。
2接種細菌
在超凈工作臺內用無菌棉拭子蘸取菌液，在管壁上擠壓去掉多余的菌液，均勻涂抹整個平板表面，最后沿平板內緣涂抹一周（用接種環(huán)密集劃線法也可以）。
3貼藥敏片
將涂抹均勻的培養(yǎng)皿底部用記號筆做好標記，眼科鑷子在酒精燈上灼燒滅菌待冷卻后，鑷取各種購買或自制的藥敏片，分別貼于相應的位置上，用鑷子輕輕按壓紙片使藥敏紙片與培養(yǎng)基表面密貼；藥敏紙片應在培養(yǎng)基表面均勻分布，各紙片中心距離大于24mm，紙片距邊緣距離大于15mm，這樣一個直徑90mm的培養(yǎng)皿可貼7個藥敏紙片。
4培養(yǎng)
最后將貼好藥敏紙片的平板倒置放于37℃±1℃恒溫培養(yǎng)箱，培養(yǎng)16-18h后取出觀察結果。
二、結果觀察與判定
1抑菌圈直徑觀察
抑菌圈直徑以肉眼見不到細菌明顯生長的邊緣為限（變形桿菌可蔓延生長至某些抗微生物的抑菌圈內，表現(xiàn)為一種細薄微弱的生長，形成一層明顯的抑制性生長環(huán)，對于這種情況應忽略不計；對于磺胺類藥物，應忽略抑菌圈內輕微的細菌生長，少于20%的菌苔，以明顯的邊緣為抑菌圈直徑）。
2根據(jù)藥敏片周圍抑菌圈的大小，判定藥物的敏感度
敏感：表示被測菌株所引起的感染可以用常用量該抗菌藥物治愈。
中介：表示被測菌株對常規(guī)用藥體液或組織中的藥物濃度的反應率低于敏感菌株，使用高于正常給藥量有療效。
耐藥：表示被測菌株不能被常用劑量藥物抑制，臨床療效不佳。
3判定
不同菌株結果判定標準不同；不同藥物判定標準不同。最終判定結果應以WS/T125-1999列表中對應的標準為準。也可以根據(jù)以下標準進行判定：
藥敏試驗藥物配制及判定標準
|
編號 |
藥品名稱 |
商品藥敏片含量 （μg/片） |
稀釋比例(ml/mg) |
判定標準 抑菌圈直徑（mm） |
||
|
S（敏感） |
I（中介） |
R（耐藥） |
||||
|
1 |
阿莫西林 |
20 |
5 |
|||
|
2 |
慶大霉素 |
10 |
10 |
≥15 |
13-14 |
≤12 |
|
3 |
硫酸阿米卡星 |
30 |
3.33 |
≥17 |
15-16 |
≤14 |
|
4 |
多西環(huán)素 （強力霉素） |
30 |
3.33 |
≥14 |
11-13 |
≤10 |
|
5 |
鹽酸環(huán)丙沙星 |
5 |
20 |
≥21 |
16-20 |
≤15 |
|
6 |
左氧氟沙星 |
5 |
20 |
≥17 |
14-16 |
≤13 |
|
7 |
諾氟沙星 |
10 |
10 |
≥17 |
13-16 |
≤12 |
|
8 |
頭孢曲松鈉 |
30 |
3.33 |
≥23 |
20-22 |
≤19 |
|
9 |
頭孢他啶 |
30 |
3.33 |
≥21 |
18-20 |
≤17 |
|
10 |
頭孢噻呋 |
2 |
50 |
|||
|
11 |
替米考星 |
15 |
6.67 |
|||
|
12 |
硫酸新霉素 |
30 |
3.33 |
|||
|
13 |
鹽酸林可霉素 |
2 |
50 |
|||
|
14 |
恩諾沙星 |
5 |
20 |
|||
|
15 |
硫酸粘菌素 |
10 |
10 |
≥11 |
- |
≤10 |
|
16 |
克林霉素 |
2 |
50 |
|||
|
17 |
紅霉素 |
15 |
6.67 |
|||
|
18 |
克拉霉素 |
15 |
6.67 |
|||
|
19 |
阿奇霉素 |
15 |
6.67 |
|||
|
20 |
磺胺間甲氧嘧啶鈉 |
300 |
0.33 |
|||
|
21 |
安泰嘉 （泰樂菌素） |
0.2 |
﹥20極敏15-20高敏 10-14中敏 ＜10不敏感 （商品藥） |
|||
|
22 |
球光 （磺氯吡嗪鈉） |
1 |
||||
|
23 |
卵管嘉 （煙酸諾坲沙星） |
10 |
||||
|
24 |
桿菌比克 （氧氟沙星） |
0.2 |
||||
|
25 |
腸安嘉 （鹽酸環(huán)丙沙星） |
3.2 |
||||
|
26 |
腸炎嘉 （硫酸新霉素） |
0.87 |
||||
|
27 |
克球嘉 |
2 |
|
（磺胺間甲氧嘧啶 鈉） |
||||||
|
28 |
莫能菌素 |
20 |
0.50 |
|||
|
29 |
痢菌凈 |
30 |
0.33 |
＞15 |
10-15 |
＜10 |
|
30 |
鹽酸克林霉素 |
5 |
2.00 |
|||
|
31 |
黃霉素 |
30 |
0.33 |
|||
|
32 |
磺胺氯吡嗪鈉 |
300 |
0.03 |
|||
|
33 |
甲氧芐啶 |
5 |
2.00 |
|||
|
34 |
桿菌肽鋅 |
30 |
0.33 |
|||
|
35 |
鹽酸沃尼妙林 |
30 |
0.33 |
|||
|
36 |
酒石酸泰樂菌素 |
50 |
0.20 |
|||
|
37 |
硫酸氨普霉素 |
30 |
0.33 |
|||
|
38 |
桿立清 |
0.04 |
﹥20極敏15-20高敏 10-14中敏 ＜10不敏感 （商品藥） |
|||
|
39 |
新暢美 |
0.1 |
||||
|
40 |
腸安泰 |
0.04 |
||||
|
41 |
喘痢嘉 |
0.02 |
||||
|
42 |
咳喘嘉 |
0.0264 |
||||
|
43 |
呼感康寧 |
0.1 |
備注：商品要通常按照說明書用量原倍配置藥敏紙片，可視情況做 2 倍、4 倍濃度配置；商品藥敏感性判定通常Φ﹥20mm 極敏；15-20mm 高敏；10-14mm 中敏；＜10mm 不敏感；某些原料藥按國標規(guī)定判定，沒有具體依據(jù)的通常也按照﹥20mm 極敏；15-20mm 高敏；10-14mm 中敏；＜10mm 不敏感判定；
抑菌圈大小使用游標卡尺精準測量，也可用直尺粗略測量（測直徑）。
三、注意事項
1要求待檢病料新鮮、無污染。
2整個試驗操作過程注意無菌操作。
3培養(yǎng)基厚度：要求厚度為4mm，直徑90mm的培養(yǎng)皿約25ml/平皿；菌液一定要比濁；盡量選用同一品牌、大小相同的棉拭子涂布細菌；自制藥敏片的厚度必須是新華1號濾紙。
4藥敏片保存：長時間不用置于-20冷凍保存，平時常用可放于4-8℃冷藏；藥敏片從冰箱拿出要與室溫平衡20min后打開蓋使用，以免潮濕影響結果。
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