摘要：為了解屠宰場非洲豬瘟病毒（ASFV）污染情況，評估其潛在傳播風(fēng)險，2018 年 10 月，在湖南省 86 個屠宰場采集樣品 895 份，使用熒光 PCR 方法進(jìn)行 ASFV 核酸檢測。結(jié)果顯示，11 個屠宰場的 43 份樣品呈 ASFV 核酸陽性，場陽性率為 12.8%，樣品陽性率為 4.8%。調(diào)查分析表明，ASFV 陽性屠宰場與是否屠宰過來自疫點(diǎn)的生豬及場內(nèi)環(huán)境、工具、車輛的消毒情況相關(guān)。調(diào)查提示，屠宰場應(yīng)繼續(xù)加大 ASFV 自檢力度，政府和主管部門需繼續(xù)加強(qiáng)檢疫監(jiān)管，以降低 ASF 擴(kuò)散風(fēng)險。

非洲豬瘟（African swine fever，ASF） 是由非洲豬瘟病毒（African swine fever virusASFV）引起豬的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，對染疫國家的生豬產(chǎn)業(yè)和相關(guān)國際貿(mào)易影響巨大，是世界動物衛(wèi)生組織（OIE）的須通報動物疫病，屬于我國一類動物疫病。ASFV 宿主是家豬和野豬，不感染人，主要通過間接和直接接觸傳播，發(fā)病豬、隱性感染豬及其排泄物、污染物以及軟蜱等媒介吸血昆蟲是其主要傳染源。自 2018 年 8 月，ASF 疫情首次在遼寧省發(fā)現(xiàn)以來，短期內(nèi)在全國多個省份接連發(fā)現(xiàn)，導(dǎo)致大量生豬被撲殺，經(jīng)濟(jì)損失慘重。2018 年 10 月湖南省發(fā)現(xiàn)首起 ASF 疫情，且在 1 個月內(nèi)連續(xù)發(fā)現(xiàn) 7 起， 給該省生豬養(yǎng)殖業(yè)帶來嚴(yán)重打擊。為了解湖南省屠宰場 ASFV 污染情況，在疫情暴發(fā)期內(nèi)，對湖南省疫點(diǎn)、疫區(qū)以及非疫區(qū)屠宰場開展了 ASFV 監(jiān)測，以期為評估 ASFV 潛在傳播風(fēng)險提供參考。

1 材料與方法

1.1 樣品采集

2018 年 10 月，在湖南省 3 個 ASF 疫區(qū)市、2 個非疫區(qū)市 86 個屠宰場，選擇待宰圈、電麻前生豬通道、放血槽、盛血器、脫毛池、屠宰場總排水溝、屠宰線、肉品存儲庫等不同生產(chǎn)環(huán)節(jié)，采集樣品 895 份，其中環(huán)境拭子樣品 757 份、豬血樣品17 份、豬肉樣品 109 份以及屠宰場內(nèi)加工的香腸 8份、臘肉 4 份。

1.2 試劑

ASFV 熒光 PCR 檢測引物和探針：由中國動物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心提供；熒光 PCR 擴(kuò)增試劑盒：購自北京世紀(jì)元亨動物防疫技術(shù)有限公司；病毒 RNA/DNA 提取試劑盒：購自蘇州天隆生物科技股份公司。

1.3 主要儀器設(shè)備

NP968 核酸提取儀：西安天隆；ABI 7500fast熒光 PCR 儀： 賽默飛； 生物安全柜： 美國BAKER；高壓滅菌鍋：上海申安。

1.4 樣品處理和檢測

按中國動物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心編制的《非洲豬瘟實(shí)驗(yàn)室檢測操作程序》進(jìn)行樣品處理、熒 光 PCR 擴(kuò)增、結(jié)果判定和廢棄物處置，按照 RNA/ DNA 提取試劑盒說明書提取核酸。

1.5 屠宰場清洗消毒

待宰圈舍、進(jìn)豬通道、卸豬臺、淋浴間等區(qū)域，每循環(huán) 1 次，徹底清理 1 次糞便，清水沖洗后 用 2%~5% 燒堿液噴灑，30 min 后再用清水沖洗；屠宰、分割加工車間，每次生產(chǎn)結(jié)束后先用清水沖洗，再用 0.1%~0.2% 的戊二醛噴霧消毒，30 min 后用清水沖洗。

1.6 陽性屠宰場檢測

根據(jù)《湖南省防治重大動物疫病指揮部辦公室關(guān)于因非洲豬瘟關(guān)聯(lián)暫停的屠宰場恢復(fù)生產(chǎn)有關(guān)事項(xiàng)的通知》（湘防重病辦﹝2018﹞15號）的規(guī)定， 暫停疫情縣以外、與疫點(diǎn)有流行病學(xué)關(guān)聯(lián)的 ASFV檢測陽性屠宰場的屠宰活動 15 d，在此期間進(jìn)行徹底清洗消毒，分別于暫停屠宰后 5、10、14 d，在待宰圈、屠宰間、放血槽、打毛間、總排水口等 5個部位，各采集 5 份環(huán)境樣品，共 25 份 / 次進(jìn)行ASFV 檢測。

2 檢測結(jié)果

2.1 總體情況

86 個屠宰場的 895 份樣品中，11 個場的 43 份樣品為 ASFV 核酸陽性，場陽性率為 12.8%，樣品陽性率為 4.8%。43 份陽性樣品包括 36 份環(huán)境 拭子樣品、1 份豬肉樣品、5 份香腸樣品、1 份臘肉樣品，其中陽性環(huán)境拭子主要采自屠宰間、放血槽、排水溝、脫毛池、生豬清洗間等位置。不同類型屠宰場檢測結(jié)果見表 1，不同類型樣品檢測結(jié)果見表2。

2.2 屠宰場清洗效果

1 個疫情無關(guān)聯(lián)陽性屠宰場（正常屠宰），首次采樣（在待宰圈、放血槽、盛血器、電麻前生豬通道、屠宰場總排水溝、屠宰線、脫毛池等7 個工作地，每個地點(diǎn)隨機(jī)采集環(huán)境拭子 3 份）2 d 后，再次采樣（7 個環(huán)節(jié)，每個環(huán)節(jié) 5 份，共35份）檢測，結(jié)果全為陰性。其間屠宰場按日常清洗消毒程序，其清洗消毒2次。另外10 個暫停屠宰的陽性屠宰場，其間共清洗消毒 3 次，每次檢測均為陰性。

3 分析與討論

本次監(jiān)測發(fā)現(xiàn)，屠宰場內(nèi)的 ASFV 樣品陽性率為 4.8%，場陽性率為 12.8%，表明屠宰環(huán)節(jié)存在 ASFV 污染。疫情關(guān)聯(lián)屠宰場陽性率（75.0%） 遠(yuǎn)高于疫點(diǎn)縣屠宰場（0）和疫情無關(guān)聯(lián)屠宰場 （2.9%），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），表明屠宰場 ASFV 污染與屠宰疫點(diǎn)養(yǎng)豬場生豬直接關(guān)聯(lián)，這也符合 ASF 高度接觸傳播的流行病學(xué)特征。

AFSV 抵抗力強(qiáng)，在外界可長期存活，任何與感染生豬接觸的行為均有引發(fā) ASF 疫情的風(fēng)險。本次檢測發(fā)現(xiàn)的 43 份陽性樣品中，有 36 份（83.7%）為環(huán)境拭子樣品，表明病毒一旦隨生豬進(jìn)入屠宰場，就會潛入屠宰間、放血槽、排水溝、脫毛池等區(qū)域，繼而污染整個屠宰環(huán)節(jié)。如果屠宰場與養(yǎng)殖場之間存在運(yùn)輸人員、車輛、工具等的頻繁接觸，那么病毒匯集、擴(kuò)散風(fēng)險巨大，如果不經(jīng)過嚴(yán)格消毒，就會使病毒進(jìn)一步擴(kuò)散。從湖南省屠宰場的消毒監(jiān)測效果看，通過嚴(yán)格和規(guī)范的消毒，可以有效殺滅 ASFV。因此，要做好屠宰場內(nèi)環(huán)境、運(yùn)輸車輛的清洗消毒工作，確保病原在屠宰場內(nèi)不交叉、不回流。

監(jiān)測結(jié)果顯示，屠宰場豬肉樣品陽性率為0.9%，表明屠宰場豬肉產(chǎn)品存在 ASFV 污染風(fēng)險，其原因與屠宰了隱性帶毒豬以及屠宰場的病毒污染有關(guān)。另外，監(jiān)測的所有香腸、臘肉樣品均來自于同一個疫情關(guān)聯(lián)屠宰（加工）企業(yè)。溯源調(diào)查發(fā)現(xiàn)，在采樣監(jiān)測前，該場多次宰殺來自疫情場的生豬，因此及時開展疫情場的外調(diào)記錄調(diào)查，追蹤屠宰場的動物產(chǎn)品流向，將有助于降低病毒經(jīng)產(chǎn)品擴(kuò)散的風(fēng)險。

此外，從與疫點(diǎn)養(yǎng)殖場有流行病學(xué)關(guān)聯(lián)屠宰場的環(huán)境、豬肉及其制品監(jiān)測結(jié)果可以看出，屠宰場是 ASF 防控的關(guān)鍵主體。如果屠宰場屠宰了隱性帶毒生豬，病毒就會進(jìn)入產(chǎn)品并長時間存活，這會給 ASF 防控和凈化帶來更大困難。因此，建議根據(jù)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部統(tǒng)一部署，要求屠宰企業(yè)繼續(xù)加大ASFV 自檢力度，政府和技術(shù)部門加強(qiáng)指導(dǎo)和監(jiān)督，把好屠宰檢疫關(guān)。

4 結(jié)論

本監(jiān)測利用熒光 PCR 方法，對湖南省86個屠宰場進(jìn)行 ASFV 核酸檢測，在11個屠宰場的43份樣品中檢測出核酸陽性，場陽性率為12.8%，樣品陽性率為 4.8%，表明屠宰場存在 ASFV 污染，其來源主要與屠宰疫情養(yǎng)殖場生豬有關(guān)。屠宰場的日常清洗消毒，可有效消除病毒，對于 ASF 防控具有積極意義。因此，屠宰場應(yīng)加強(qiáng) AFS 自檢工作，堅(jiān)持日常清洗消毒制度，阻斷病毒通過屠宰產(chǎn)品再次擴(kuò)散傳播。