公豬精液質(zhì)量好壞直接與豬場(chǎng)情期受胎率、產(chǎn)仔數(shù)休戚相關(guān)，所以豬場(chǎng)再怎么強(qiáng)調(diào)公豬精液的重要性都不為過。為研究西南地區(qū)高溫高濕的應(yīng)激環(huán)境下新胺基維他對(duì)種公豬精液質(zhì)量的影響，選用16頭成年種公豬按品種配對(duì)分3組，對(duì)照組4頭，飼喂基礎(chǔ)飼糧，2個(gè)試驗(yàn)組各6頭，分別在基礎(chǔ)飼糧中添加新胺基維他營(yíng)養(yǎng)液10mL/頭、20mL/頭。結(jié)果表明，在高溫應(yīng)激環(huán)境條件下，兩個(gè)試驗(yàn)組精子總數(shù)顯著增加（P<0.05），精子畸形率極顯著降低（P<0.01）。采精頻率耐受性試驗(yàn)結(jié)果表明，20mL/頭新胺基維他組精子總數(shù)沒有出現(xiàn)顯著性減少的變化（P>0.05），而10mL/頭新胺基維他組和對(duì)照組均極顯著降低（P<0.01）。說明在種公豬基礎(chǔ)飼糧中添加20mL/頭新胺基維他能顯著增加公豬精子總數(shù)，降低精子畸形率，提高公豬對(duì)采精頻率的耐受力，延長(zhǎng)精液的保存時(shí)間。

新胺基維他；精子；高溫應(yīng)激

品種、營(yíng)養(yǎng)和環(huán)境三大因素直接影響一個(gè)豬場(chǎng)的經(jīng)濟(jì)效益，對(duì)于種公豬而言，環(huán)境溫度是影響其繁殖性能的首要因素。夏天高溫導(dǎo)致公豬食欲不振，性欲下降，公豬精液品質(zhì)下降，如死精、少精、無精等。生產(chǎn)中通過調(diào)整飼糧蛋白質(zhì)和氨基酸水平、提高能量濃度可減少體增熱，是克服熱應(yīng)激的有效措施之一[1-2]。

本試驗(yàn)在西南地區(qū)高溫高濕季節(jié)種公豬飼糧中添加一種商品化的抗熱應(yīng)激產(chǎn)品—西班牙海博萊生物大藥廠生產(chǎn)的新胺基維他，研究其在高溫高濕條件下對(duì)公豬精液品質(zhì)的影響，以減少高溫對(duì)公豬精子生成和精子活力等造成的不良影響。

一、材料與方法

1.1 試驗(yàn)時(shí)間與地點(diǎn)

試驗(yàn)于2014年7—8月在重慶某原種豬場(chǎng)進(jìn)行，預(yù)試期7d，正試期42d。

1.2 試驗(yàn)藥品

新胺基維他營(yíng)養(yǎng)液由西班牙海博萊生物大藥廠生產(chǎn)，其主要成分：

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

選擇長(zhǎng)白公豬、杜洛克公豬和渝榮系公豬共16頭，考慮品種因素將其分成3組，對(duì)照組4頭，飼喂基礎(chǔ)飼糧；2個(gè)試驗(yàn)組各6頭，分別在基礎(chǔ)飼糧中添加新胺基維他營(yíng)養(yǎng)液10mL/頭、20mL/頭?；A(chǔ)飼糧采用大型飼料公司生產(chǎn)的全價(jià)公豬飼料。試驗(yàn)豬自由飲水，每天上午和下午各清理1次豬舍。試驗(yàn)公豬均是成年且在生產(chǎn)中正常使用的繁殖種公豬。試驗(yàn)開始每周保持正常的1～2次采精頻率。豬舍采用西南地區(qū)規(guī)?；i場(chǎng)常用的風(fēng)機(jī)-濕簾降溫方式，每天觀察豬的精神狀況，記錄豬舍內(nèi)外溫度、濕度。

1.4 樣品的收集與處理

試驗(yàn)前樣品的收集：飼喂前3組在同一天內(nèi)進(jìn)行采精、鏡檢，2000r/min離心20min，取上清液1mL裝于EP管，-20℃冰箱冷凍保存待測(cè)。試驗(yàn)至第6周后開始收集飼喂后精液樣品（同飼喂前樣品收集方法一致）。精液采用BTS稀釋后常溫保存，比較其保存時(shí)間的差異。采精耐受性試驗(yàn)，連續(xù)3d保持每天采精1次，第3天收集的精液采用相同方法處理。

1.5 測(cè)定指標(biāo)

參照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB23238—2009《種豬常溫精液》方法測(cè)定豬的射精量、顏色氣味、精子活力、精子畸形率，精子密度采用血球計(jì)數(shù)板測(cè)量，然后根據(jù)射精量與精子密度計(jì)算每次射精總精子數(shù)。精液收集和檢測(cè)均由同一經(jīng)驗(yàn)豐富的技術(shù)人員負(fù)責(zé)；精清生化指標(biāo)丙二醛（MAD）、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、睪酮（T）的含量用北京冬歌博業(yè)生物科技有限公司進(jìn)口分裝的ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）檢測(cè)試劑盒，使用分光光度計(jì)進(jìn)行測(cè)定。

1.6 統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)用Excel軟件處理，用SPSS19.0中的配對(duì)t檢驗(yàn)進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

二、結(jié)果與分析

2.1 試驗(yàn)期內(nèi)環(huán)境溫度

由表1可知，舍外溫度平均為31.79℃；豬舍內(nèi)使用濕簾-風(fēng)機(jī)降溫系統(tǒng)，平均溫度為29.89℃。舍內(nèi)比舍外溫度低1.9℃。

2.2 新胺基維他對(duì)精子總數(shù)、活力和畸形率的影響

試驗(yàn)收集期精液的顏色與氣味均正常。由表2可以看出，2個(gè)試驗(yàn)組飼喂后精子總數(shù)顯著增加，20mL/頭新胺基維他組增加更為明顯，而對(duì)照組沒出現(xiàn)顯著變化；精子活力各組飼喂前后差異不顯著；精子畸形率，10mL/頭新胺基維他組和20mL/頭新胺基維他組飼喂后極顯著降低，而對(duì)照組飼喂前后差異不顯著。整體來看，20mL/頭新胺基維他組使用效果更好。

2.3 新胺基維他對(duì)精液保存時(shí)間的影響

試驗(yàn)6周后，分別取20mL/頭新胺基維他組和對(duì)照組的精液用相同的稀釋保存劑處理后，17℃冰箱保存，每12h對(duì)精子活力進(jìn)行檢測(cè)，其活力都出現(xiàn)顯著下降，但20mL/頭新胺基維他組比對(duì)照組下降趨勢(shì)要緩慢，見表3。

2.4 新胺基維他對(duì)采精頻率耐受性的影響

采精頻率耐受性試驗(yàn)結(jié)果表明，20mL/頭新胺基維他組精子總數(shù)沒有出現(xiàn)顯著性變化，而10mL/頭新胺基維他組和對(duì)照組均出現(xiàn)極顯著降低（表4）。

2.5 新胺基維他對(duì)精清中生理指標(biāo)的影響

由表5可知，10mL/頭新胺基維他組和20mL/頭新胺基維他組精清中的丙二醛含量和天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶活性飼喂后均出現(xiàn)降低，而對(duì)照組則升高，但飼喂前后均沒有達(dá)到顯著水平。而精清中睪酮含量3組飼喂后均升高，但沒有達(dá)到顯著水平。

3 討論與結(jié)論

夏季熱應(yīng)激是指動(dòng)物機(jī)體應(yīng)對(duì)高溫環(huán)境所產(chǎn)生的非特異性應(yīng)答反應(yīng)的總和，種公豬皮下脂肪較厚，汗腺功能退化，適宜生活的環(huán)境溫度為18～24℃，環(huán)境溫度過高對(duì)公豬精液品質(zhì)影響較大，尤其是高溫季節(jié)對(duì)其影響特別嚴(yán)重，易造成精液品質(zhì)下降，出現(xiàn)死精和無精。高溫使公豬血液中的促腎上腺皮質(zhì)激素水平升高，垂體前葉促性腺激素減少，促甲狀腺分泌減少，從而抑制睪丸產(chǎn)生類固醇，導(dǎo)致公豬的交配欲減退；高溫也會(huì)使精細(xì)胞發(fā)生變性，致使精液品質(zhì)（射精量、活力、畸形率、密度等）降低，從而使種公豬的生產(chǎn)性能受到嚴(yán)重影響，甚至失去生育能力[3]。

張莉等研究發(fā)現(xiàn)，持續(xù)高溫引起的熱應(yīng)激使精子在附睪內(nèi)的運(yùn)行與成熟受阻，導(dǎo)致射出精液中總精子數(shù)減少，畸形率增高，精液品質(zhì)下降[4]；韓有元對(duì)不同溫度下24頭杜洛克公豬的生精功能統(tǒng)計(jì)，結(jié)果顯示，溫度越高，精液量、精子密度、精子活力越低，精子畸形率則越高[5]。

隨著養(yǎng)豬業(yè)高度集約化發(fā)展，如何緩解夏季豬只（尤其是種公豬）的熱應(yīng)激是當(dāng)前養(yǎng)豬業(yè)亟待解決的重要問題。劉煒等[6]研究表明，濕簾-風(fēng)機(jī)降溫系統(tǒng)能夠防止公豬熱應(yīng)激，使公豬精液質(zhì)量保持正常，避免夏季高溫對(duì)豬場(chǎng)繁殖性能的不利影響。在本試驗(yàn)期間，舍外最高溫度達(dá)到39℃，但豬舍內(nèi)采用規(guī)模豬場(chǎng)較常規(guī)的濕簾-風(fēng)機(jī)降溫系統(tǒng)，可以有效減少高溫的影響。

維生素是畜體代謝所必需的一類小分子有機(jī)化合物，由于其在動(dòng)物飼糧中所占比重極少，因而其作用往往被忽視，但幾乎所有的維生素都對(duì)種豬的繁殖性能有影響。高溫環(huán)境會(huì)造成飼糧中某些維生素氧化變質(zhì)，生物利用率降低。李雪梅等在基礎(chǔ)飼糧中每天額外添加4000IU維生素A，結(jié)果表明，種公豬的采精量、精子密度提高，精子畸形率降低[7]。

李秋鳳在研究飼糧營(yíng)養(yǎng)調(diào)控對(duì)哺乳動(dòng)物養(yǎng)分消化代謝、泌乳及精液品質(zhì)的影響時(shí)發(fā)現(xiàn)，維生素A能夠清除氧自由基、單線態(tài)氧和降低脂質(zhì)過氧化物的產(chǎn)生。維生素E是維持生殖系統(tǒng)正常結(jié)構(gòu)和功能所必需的物質(zhì)，通過垂體前葉分泌促性腺激素，調(diào)節(jié)性機(jī)能，從而促進(jìn)精子的形成與活動(dòng)[8]。Audet等研究表明，在飼糧中額外添加維生素可以增加精液的產(chǎn)量[9]。

新胺基維他是多種限制性氨基酸和維生素的混合制劑，可以全面高效地補(bǔ)充限制性氨基酸，充分補(bǔ)充關(guān)鍵的維生素A、維生素D3、維生素E、維生素B1和維生素B6，幫助機(jī)體對(duì)抗各種應(yīng)激等。

本研究在基礎(chǔ)飼糧中分別添加10mL/頭和20mL/頭新胺基維他營(yíng)養(yǎng)液6周后，精子總數(shù)分別由446.06億個(gè)和461.57億個(gè)增加到584.47億個(gè)和605.92億個(gè)，飼喂前后差異達(dá)到了顯著水平，并都極顯著降低了精子畸形率。

Brzezińska等認(rèn)為，精子的氧化損傷是多不飽和脂肪酸在活性氧族產(chǎn)生和清除活動(dòng)不平衡的結(jié)果，正常情況下，射出精液中清除活性氧族作用的能力依賴于精漿的抗氧化物質(zhì)[2]。丙二醛是機(jī)體產(chǎn)生的氧自由基攻擊生物膜中的多不飽和脂肪酸，引發(fā)脂質(zhì)過氧化作用，并因此形成的過氧化物。丙二醛含量的高低間接反應(yīng)了機(jī)體細(xì)胞受自由基攻擊的嚴(yán)重程度[10]。曾新斌在夏季高溫豬飼糧中添加牡蠣粗多糖發(fā)現(xiàn)，其對(duì)精液抗氧化指標(biāo)和種公豬的生精功能有明顯改善作用，丙二醛含量極顯著降低（P<0.01）[11]。睪酮是睪丸間質(zhì)細(xì)胞分泌的維持精子發(fā)生的主要激素之一，由間質(zhì)細(xì)胞分泌，并經(jīng)淋巴循環(huán)擴(kuò)散到曲細(xì)精管、附睪與輸精管等部位。褚曉紅等研究表明，飼糧中添加硒、維生素E能夠提高豬精液中睪酮含量，并對(duì)公豬精子密度和活力有促進(jìn)作用[12]。

本試驗(yàn)10mL/頭新胺基維他組和20mL/頭新胺基維他組丙二醛含量和天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶活性均降低，反應(yīng)了精子細(xì)胞受自由基攻擊程度降低，精子質(zhì)量提高，而對(duì)照組出現(xiàn)了升高，但均沒用達(dá)到顯著性水平，表明飼喂新胺基維他后精液抗氧化指標(biāo)和種公豬的生精功能有改善作用。

成年公豬使用中，每周采精次數(shù)一般不能超過3次，如果使用過頻會(huì)出現(xiàn)射精量減少，畸形率增高，造成精子受精力下降，如果再繼續(xù)使用，則出現(xiàn)采出的精液無精子現(xiàn)象。阮的樂等研究公豬采精頻率對(duì)公豬精液質(zhì)量的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，公豬如果長(zhǎng)期連續(xù)每2d采1次精會(huì)造成34.6%的精液活力在0.7以下[13]。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，20mL/頭新胺基維他組連續(xù)3d每天采精1次的公豬，其第3天精子總數(shù)沒有出現(xiàn)顯著性下降，而對(duì)照組和10mL/頭新胺基維他組均出現(xiàn)極顯著降低。本試驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)，20mL/頭新胺基維他組和對(duì)照組雖然在常溫保存過程中精子活力都在下降，但其活力降低的速度更緩慢。

本試驗(yàn)表明，在公豬基礎(chǔ)飼糧中添加20mL/頭新胺基維他能顯著增加公豬精子總數(shù)；降低精子畸形率；提高公豬對(duì)采精頻率的耐受力；延長(zhǎng)精液的保存時(shí)間。